Определение крови по цоликлонам

Определение групп крови с помощью цоликлонов

Определение крови по цоликлонам

Определение группы эритроцитарных антигенов и резус-фактора давно стало одним из обязательных исследований для большинства пациентов, поступающих на стационарное лечение. Его проведение возможно на любом уровне оказания медицинской помощи при условии наличия необходимых реагентов и инструментов.

Обычно, определение группы проводится с помощью стандартных сывороток, хотя, конкуренцию ему составляет еще один метод, сходный по методике проведения с эталонным – использование цоликлонов.

Цоликлон – моноклональное антитело, образующееся путем генной инженерии. Чаще всего, для его получения используют мышей – животному вводят специальный антиген, а после получают асцитную жидкость грызуна, в которой и содержатся указанные антитела.

Морфологически, они относятся к иммуноглобулинам класса М, т.е. антителам острой фазы. Механизм действия их обусловлен образованием комплекса антиген-антитело, где в качестве антигена выступают некоторые молекулы (в данной ситуации – белки, определяющие группу крови и ее резус), расположенные на мембране клетки.

Какие существуют препараты цоликлонов

В настоящее время, в лабораторной диагностике используется 3 типа стандартных цоликлонов – анти-А, анти-В и анти-АВ. Каждый из них вступает в реакцию со специфичным для него антигеном, обуславливая развитие иммунной реакции.

Эти препараты выпускаются в виде ампул или флаконов, содержащих 5 или 10 мл раствора антител. Все они имеют специфическую окраску, по которой и проводится определение каждого типа:

  • анти-А окрашен в красный цвет;
  • анти-В выпускается в виде раствора синего цвета;
  • комбинированный цоликлон анти-АВ (или анти-D) специфической окраски не имеет.

Цоликлон анти-АВ может быть модифицированным и использоваться для определения резус фактора.

Алгоритм исследования достаточно прост, специальной подготовки к исследованию от пациента не требуется.

Определение группы может проводиться в нативной крови как с использованием консерванта, так и без него. Для исследования берут капиллярную кровь из пальца пациента.

Обязательно соблюдать условия окружающей среды для получения достоверной информации: анализ проводится в хорошо освещенном помещении с умеренной влажностью и температурой не ниже 20 градусов.

Кроме того, следует удостовериться, что кровь была взята у пациента правильно, а срок годности используемых реагентов еще не истек.

На специальную пластину (или планшетку), на расстоянии друг от друга с помощью специальной пипетки наносят по 1 крупной капле каждого из антител (для удобства, лучше располагать их так – А, В, АВ). Возле каждой из капель цоликлонов необходимо поместить по одной капле исследуемой крови и при покачивании планшетки постепенно их перемешать.

Визуально, результаты исследования можно определить уже через 5-10 секунд после начала анализа. В исследуемой крови обнаруживаются так называемые “красные конгломераты” – склеившиеся эритроциты.

Образуются они в результате реакции агглютинации, т.е. в том случае, когда цоликлон соответствует антигену (в том числе и при исследовании на резус-фактор).

Если же агглютинации не наблюдается, то соответственно имеется расхождение между исследуемыми антигенами и имеющимися антителами.

Как проводится оценка результатов исследования и определение групповой принадлежности?

Как уже говорилось выше, результат исследования определяется по наличию реакции агглютинации визуально или с помощью анализаторов:

  • если ее нет ни в одной из капель, значит исследуемая кровь имеет первую группу.
  • когда она наблюдается в ячейке, где расположен цоликлон анти-А, значит в исследуемой крови содержится данный антиген. Таким образом, исследуемая кровь может быть как второй (генотип АА или А0) или 4 (АВ) групп.
  • если агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-В, то исследуемая кровь 3 (ВВ, В0) или 4 группы.

Для проверки правильности результатов на планшетке и добавляется цоликлон анти-АВ (обладающий свойством определять и резус-фактор). Он, в какой-то мере является контрольным, так как именно по наличию в нем агглютинатов судят о правильности проведенного анализа. Если реакция произошла во всех ячейках, значит исследуемый образец относится к 4 группе крови.

Возможна ситуация, когда агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-АВ, а в других образцах ее нет. В таком случае можно говорить о неправильно проведенном анализе, и проводят повторное определение группы и резус-фактора.

Что следует учитывать при проведении анализа

Чтобы результат анализа был максимально достоверным, при проведении процедуры необходимо соблюдать ряд условий:

  • реагенты должны храниться в холодном месте при температуре +2-8 градусов во флаконах с плотно закрученной крышкой (в случае нарушения правил хранения они быстро теряют свои свойства);
  • для проведения анализа нельзя использовать цоликлоны с истекшим сроком хранения (он составляет около 30 дней) или жидкости, которые содержат осадок, хлопья или мусор;
  • исследование выполняется в хорошо освещенном помещении при температуре воздуха не ниже +15 и не выше +25 градусов, причем в нем не должно быть грязи, пыли и других факторов, способных исказить результат;
  • при нанесении биоматериала и реагентов на поверхность планшетки следует точно соблюдать пропорции – если крови будет слишком много, реакцию сложнее отследить, а в противоположном случае (при малом объеме) она будет слишком медленной;
  • нельзя допускать, чтобы капли крови, смешанные с разными типами цоликлонов, сливались вместе – если это случилось, исследование проводят заново; по этой же причине для смешивания реагентов с биоматериалом следует использовать разные палочки.

Продолжительность реакции должна составлять не менее 3 минут, а при сомнительном результате время наблюдения за образцами биоматериала следует продлить до 5 минут. Однако по истечении 10 минут может произойти подсыхание биоматериала и естественное выпадение эритроцитов в осадок, поэтому доверять такому исследованию не стоит.

Реакция со стандартными эритроцитами

Для реакции со стандартными эритроцитами необходимы стандартные эритроциты трёх групп крови: 0 (I), А (II), B (III).

Методика проведения реакции со стандартными эритроцитами

  1. Кровь для исследования берут из вены в пробирку, центрифугируют или оставляют на 30 мин для получения сыворотки.
  2. На маркированную тарелку наносят три больших капли (0,1 мл) сыворотки крови из пробирки, а рядом с ними по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп.
  3. Соответствующие капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией добавляют NaCl 0,9% и оценивают результат.

Оценка результатов проведения реакции со стандартными эритроцитами

Оценивают результаты, полученные со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и стандартными эритроцитами. Особенность результатов реакции со стандартными эритроцитами — эритроциты группы 0 (I) считают контрольными.

Результат перекрёстного способа считают достоверным, если при реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами ответы о группе исследуемой крови совпадают.

Если этого не происходит, обе реакции следует переделать.

Расшифровка результатов

Спустя несколько минут после соединения реагентов можно наблюдать результаты. Полное смешивание жидкостей говорит об отсутствии реакции, а агглютинация проявляется появлением красных сгустков в прозрачном растворе. Это эритроциты, которые склеиваются между собой при контакте с несовместимыми моноклональными антителами. Далее можно расшифровать результаты по простому алгоритму:

А еще советуем почитать:Что такое группа крови и резус-фактор (таблица)

  • 1 группа (0) — агглютинация отсутствует в обеих каплях, поскольку на эритроцитах отсутствуют агглютиногены;
  • 2 группа (А) — реакция наблюдается в первой капле с цоликлоном анти-А;
  • 3 группа (В) — во второй капле происходит склеивание эритроцитов при контакте с реагентом анти-В;
  • 4 группа (АВ) — появление красного осадка в обеих каплях.

Четвертая группа крови считается самой редкой, поэтому при появлении агглютинации в обеих лунках анализ проводится повторно. Кроме того, кровь необходимо добавить в обычный физиологический раствор, чтобы исключить вероятность опасных заболеваний. У здорового человека она никак не прореагирует с физраствором, а эритроциты не будут склеиваться.

Для чего проводится анализ

Группа и резус-фактор – генетически обусловленные характеристики крови, которые наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении всей жизни человека. Классификация групп крови осуществляется, исходя из определенного набора биохимических параметров и состава антигенов, и насчитывает 4 основных группы.

Переливание пациенту крови несовместимой группы или с другим резус-фактором несет с собой смертельную опасность – иммунная система начинает вырабатывать антитела против чужеродных клеток, которые атакуют и разрушают их.

Именно по этой причине в ситуациях, которые несут с собой риск обширной кровопотери, необходимо точное определение принадлежности крови и резус-фактора как у донора, так и у реципиента.

Определение группы крови и резус фактора

Практически сразу после рождения у ребенка берется анализ крови на группу крови и резус-фактор. Эти данные остаются неизменными на всю жизнь. Однако не всегда родители запоминают группу крови и резус малыша.

Следовательно, не могут их сообщить, когда ребенок повзрослеет. Поэтому многие люди самостоятельно сдают анализ на группу крови и Rh. Современная медицина предлагает несколько методов определения группы крови и резус-фактора.

Вот самые популярные из них.

Цоликлоны для определения группы крови и резуса

Узнать группу крови можно с помощью цоликлонов. Этот довольно новый метод позволяет получить практически 100% достоверный результат.

Цоликлонами называются моноклинальные антитела, которые синтезированы благодаря разработкам генной инженерии из жидкой ткани стерильных мышей. Они используются для того, чтобы выявить, какая группа у крови по системе АВО.

Такой вид анализа выполняется в условиях лаборатории. Для получения достоверного результата во время исследования должны быть соблюдены ряд правил. Прежде всего, температура воздуха в помещении, где проводятся анализы, не должна быть ниже +15 градусов по Цельсию и выше +25 градусов по Цельсию.

Также в лаборатории должно быть хорошее освещение. Для выполнения анализа используются только качественные реагенты. Они не должны иметь замутнения и содержать хлопья. Для каждого реагента должна быть применена отдельная пипетка, чтобы не допустить смешивание.

Алгоритм действия в данном случае будет следующим. На двух противоположных сторонах тарелки выполняются надписи анти-А и анти-В, под которые лаборант помещает по 0,1 мл соответствующего цоликлона. Определить их можно по оттенку.

Так, у цоликлона анти-А он желто-розовый, а анти-В – синий. Далее, под реагент помещается капля крови. С помощью стеклянной палочки обе субстанции смешиваются.

После этого берется чистая палочка, и такая манипуляция выполняется с двумя другими субстанциями.

Если же процесса агглютинации нет, то цоликлон приобретает красный цвет. После этого происходит определение группы крови:

  • Если агглютинация не идет ни с одной, ни с другой стороны тарелки, то в эритроцитах нет антигенов А и В, следовательно, кровь принадлежит к первой группе.
  • Если агглютинация происходит только там, где присутствовал цоликлон анти-А, то в форменных клетках крови (эритроцитах) присутствует лишь антиген А. Следовательно, кровь принадлежит второй группе.
  • Если агглютинация происходит только там, где присутствовал цоликлон анти-В, то в форменных клетках крови (эритроцитах) присутствует лишь антиген В. Следовательно, кровь принадлежит к третьей группе.
  • Если процесс агглютинации идет в обоих случаях, то в эритроцитах есть антигены А и В. В такой ситуации рекомендуется сделать дополнительный анализ. Для его проведения берется капля крови пациента и смешивается с изотоническим раствором хлорида натрия в количестве 0,1 мл. Если при этом агглютинация не наблюдается, то определяют четвертую группу крови.

Данным методом можно также определить резус-фактор. Алгоритм будет таким же, как и при определении группы крови.

На белую тарелку помещается цоликлон анти-D, а рядом с ним капля крови пациента. Она должна быть в 10 раз меньше реагента. Обе субстанции смешиваются и в том случае, если агглютинация началась, то определяется положительный резус-фактор, в том случае, если нет, то резус-фактор отрицательный.

Методика определение группы крови по системе АВО

Как определить группу крови по системе АВО? Методика распознания группы крови и резус-фактора по системе АВО не менее популярна, чем предыдущая. Исследование также проводится в лабораторных условиях. Техника выполнения анализа по системе АВО проста.

К ним добавляются капли крови, размеров раз в 10 меньше. Затем, субстанции смешиваются, и наблюдается реакция. Спустя 5 минут, лаборант может начать расшифровку. Оценивается агглютинация, при которой возникают хлопья, а сыворотка становится бесцветной.

Метод АВО выдает такие результаты:

  • агглютинации нет нигде, следовательно, у человека первая группа крови;
  • агглютинация идет в сыворотках О и В, значит, кровь 2 группы;
  • агглютинация идет в сыворотках О и А, значит, кровь 3 группы;
  • агглютинация идет во всех сыворотках АВО, значит, требуется дополнительное исследование, в котором будет задействована сыворотка для определения четвертой группы. Если в данном случае процесс агглютинации не состоялся, значит, исследуемая кровь относится к 4 группе.

Источник: https://obsleduem.net/all/opredelenie-gruppy-krovi-po-coliklonam/

Б. Определение группы крови с помощью цоликлонов (моноклональных антител)

Определение крови по цоликлонам

Используются стандартные наборымоноклональных антител высокойспецифичности, содержащие реагенты(цоликлоны) анти-А, анти-В и анти-АВ. Длякаждого определения группы кровидостаточно применять по одной серииреагентов (цоликлонов) анти-А и анти-В.

На маркированную пластинку капают втри точки, исследуемые эритроциты (0,02мл). Рядом с ними, под соответ­ствующиминадписями, помещают цоликлоны анти-А,анти-В и анти-АВ по одной капле (0,1 мл) всоотношении 1:5… 1:6. После смешиванияреагентов и крови стеклянными палочками(уголками предметных стекол), пластинкупериодически покачивают, ход реакциинаблюдают в течение 3 мин.

Оценка результата проводится по наличиюагглютинации эритроцитов с соответствующимреагентом.

Возможны четыре варианта определениярезультатов:

а) Агглютинация во всех трех капляхцоликлонов – это значит, что исследуемыеэритроциты содержат оба антигена (А иВ) и кровь принадлежит к группе АВ (IV).

В целях исключения панагглютинации,которая может наблюдаться у отдельныхбольных (миеломная болезнь, ожоговаяболезнь), а также в пуповинной кровиноворож­денных, в случае установлениягруппы крови АВ (IV)необходимо провести контрольноеисследование: одну каплю (0,1 мл)изотонического раствора натрия хлоридасмешать с маленькой каплей (0,01 мл)исследуемой крови. Реакция агглютинациидолжнаотсутствовать.

б) Агглютинация с цоликлонами анти-А ианти-АВ – это означает, что исследуемыеэритроциты содержат только антиген Аи кровь принадлежит к группе А (II).

в) Агглютинация с цоликлонами анти-В ианти-АВ – это означает, что исследуемыеэритроциты содержат только антиген Ви кровь принадлежит к группе В (III).

г) Агглютинация отсутствует во всехтрех каплях цоликлонов – это значит, чтоисследуемые эритроциты не содержатантигенов А и В, и кровь принадлежит кгруппе 0(I).

Оценка результатов определения группкрови при помощи цоликлонов приведенав таблице:

Группа кровицоликлон «анти-A»цоликлон «анти-B»цоликлон «анти-АВ»
0(I)
A(II)++
B(III)++
AB(IV)+++

Знаком (+) обозначено наличие агглютинации,знаком (-) ее отсутствие.

При наличии агглютинации со всеми тремяреагентами (цоликлонами) необходимоисключить неспецифическую агглютинациюисследуемых эритроцитов. Для этого, ещёодну каплю эритроцитов смешивают скаплей физиологического раствора. Кровьможно отнести к группе AB(IV) только приотсутствии агглютинации эритроцитовв физиологическом растворе.

Подробные сведения по вопросу «Определение группы крови системы аво цоликлонами»

Цоликлоныизготавливают из водяночной (асцитной)жидкости лабораторных мышей – носителей«анти – А» и «анти – В» гибридом.

Цоликлон«анти – А»(красного цвета)представляет собой раствор антител«анти – А».

Цоликлон «анти – В»(синегоцвета) представляет собой раствор «анти– В».

Цоликлон «анти – АВ»(неокрашенный)представляет собой смесьрастворов антител «анти – А» и «анти– В» и предназначен для дополнительногоконтроля группы крови О(I).

Срок хранения– 2 года при температуре+2°…+6°

Вскрытый флакон можно хранитьвзакрытом виде при температуре +20…+60в течение 21 дня (дату вскрытия флаконаобязательно пишут на его этикетке).

Цоликлоны предназначены дляопределения групп крови человека системыАВ0 в реакциях гемагглютинации, ониприменяются взамен стандартных иммунныхсывороток и параллельно с ними.

Цоликлоны предназначены для выявленияв эритроцитах человека антигенов системыАВ0. Анализ может проводиться с кровью,как взятой в консервант, так и безконсерванта, а также и с капиллярной кровью, взятой из пальца. Технологияизготовления цоликлона исключаетвозможность его заражения патогеннымидля человека вирусами.

Определение группы крови проводится впомещении с хорошим освещением притемпературе +150…+250напластинке светлого однотонного цветас чистой сухой обезжиренной поверхностью(возможно использование планшетов дляопределения групп крови). Такженеобходимы:

– одноразовые пастеровские пипетки длянанесения на пластинку капель исследуемойкрови;

– палочки стеклянные (предметные стёкла)для смешивания цоликлонов с исследуемойкровью;

-пробирки с исследуемой кровью (вштативе).

Проведение исследования. Оценкарезультата:

Нанесите на планшет (пластинку)индивидуальными пипетками цоликлоны«анти–А», «анти–В» и «анти–АВ» поодной большой капле (0,1мл) подсоответствующими надписями (прииспользовании неградуированных пипеток,0,1мл – это одна полная капля).

Рядом с каждой каплей раствора антител нанесите маленькую (0,02мл) каплюисследуемой крови. Соотношение «цоликлон:кровь» соответствует соотношению «5:1».Смешайте каждую каплю цоликлона с каплейкрови индивидуальной чистой стекляннойпалочкой.

Наблюдайте за ходом реакциис цоликлонами, при лёгком покачиваниипластинки (планшета). в течение 3 минут.

Агглютинация эритроцитов цоликлонамиобычно наступает в первые 3–5 секунд,но наблюдение следует вести 3 минут,ввиду более позднего появления агглютинации эритроцитов, содержащихслабые разновидности антигенов АилиВ.

Результат реакции в каждой капле можетбыть положительным или отрицательным.

Положительный результат выражается всклеивании (агглютинации) эритроцитов.Агглютинаты видны невооружённым глазомв виде мелких красных зёрнышек, песчинок,быстро сливающихся в крупные хлопья, акапля быстро просветляется.

При отрицательной реакции, гемагглютинацияне развивается, капля остаётся равномерноокрашенной в красный цвет, агглютинаты(зёрнышки, песчинки, хлопья) в ней необнаруживаются.

Объяснениерезультатов реакции исследуемой кровис цоликлонами представлено в таблице.

Результаты реакций с цоликлонамиИсследуемая кровь принадлежит к группе
контрольцоликлонцоликлонцоликлон
физраствор(соответствует сыворотке IV группы)“анти – А”(соответствует сыворотке III группы)“анти – В”(соответствует сыворотке II группы)“анти – АВ”(соответствует сыворотке I группы)
ОI
++А(II)
++В(III)
+++АВ (IV)

Знакомплюс (+) обозначено наличие агглютинации.

Знакомминус (-) обозначено отсутствиеагглютинации.

При положительной реакции агглютинациисо всеми тремя цоликлонами, необходимоисключить неспецифическую агглютинациюисследуемых эритроцитов.

Для этого необходимо отдельно смешатьодну большую (0,1мл) каплю физиологическогораствора с маленькой (0,05–0,01мл) каплейисследуемой крови.

Кровь можно отнести к группе АВ(IV)только при отсутствии агглютинацииисследуемых эритроцитов в физиологическомрастворе.

При наличии агглютинации, при этомконтрольном исследовании, заключениео групповой принадлежности крови неделают, образец крови направляют вспециализированную лабораторию.

Окончательно, групповую принадлежностькрови (в системе АВ0) устанавливают влаборатории перекрёстным способом –по результатам перекрёстного определения:антигеновАиВна эритроцитах,антител «анти–А»и«анти–В»в сыворотке.

Источник: https://studfile.net/preview/4021625/page:7/

Определение группы крови цоликлонами: резус-фактора, таблица, расшифровка результатов – Про Кровь

Определение крови по цоликлонам

  • Цоликлоны – моноклинальные антитела, которые были получены из крови мышей с помощью генной инженерии и используются для определения группы крови системы АВО и резус-фактора.
  • Цоликлоны, в противовес стандартным сывороткам, отличаются высокой активностью и авидностью (временем наступления, а также выраженностью склеивания (реакции агглютинации).
  • Основные цоликлоны:
  • Анти-A,
  • Анти-B,
  • Анти-AB,
  • Анти-0 и т.д.

По цоликлонам определяют резус-фактор и группы крови.

Техника определения групп с помощью цоликлонов

Определение данным методом производится в лабораторных условиях. Температура воздуха должна находиться в пределах +15 – + 25 градусов по Цельсию. Исследование должно проводиться при достаточно хорошем освещении.

Реагенты необходимо хранить плотно закрытыми, так как при высыхании значительно снижается активность антител.

Нельзя использовать содержащие хлопья и мутные реагенты. Для каждого из реагентов требуется отдельная пипетка.

Анализ проводится на белой тарелке или планшете с хорошо смачиваемой поверхностью. Благодаря высокой активности и авидности цоликлонов, есть возможно применение по серии реагентов анти-A и анти-B.

На планшете нужно сделать надписи с названиям антигенов анти-A/анти-B. Далее снизу от соответствующих надписей капают примерно 0,1 миллилитр цоликлонов. У реагента анти-A цвет желтовато-розовый, у анти-B – синий.

Определение групп крови

Возле моноклональных антител капают по одной капле крови, смешивают ее уголком предметного стекла или стеклянной палочкой с реагентами. Перед дальнейшим смешиванием пар капель необходимо тщательно промыть и насухо вытереть стекло или палочку.

Наблюдение за процессом агглютинацией ведут в течение 2,5 минут, при этом тарелку или планшет нужно слегка покачивать. По истечении времени оценивают результат. Стоит отметить, что наблюдения за агглютинацией не требуют каких-либо специальных приспособлений.

Агглютинаты достаточно хорошо видны даже невооруженным глазом, быстро сливаясь и образуя большие хлопья. В случае, если не происходит склеивания, капля реагента приобретает равномерную окраску красного цвета.

Определение резус-фактора

Для определения резус-фактора наносят на планшет большую каплю анти-D-супе, возле нее – маленькую каплю (меньше в десять раз) исследуемой крови. Производят смешивание и оценивают полученный результат. Если реакция агглютинации началась, данная методика определяет кровь как резус-положительную, если резус-фактор отрицательный – агглютинации нет.

Определение резус-фактора

Препараты цоликлонов

Выделяют эритротест-цоликлон анти-D.

Существуют три разновидности:

  • Обычный анти-D-цоликлон. При его добавлении развивается реакция непрямой агглютинации,
  • Супер. Вызывает прямую агглютинацию,
  • Препарат анти-D-микс, имеющий в составе компоненты обычного и супер цоликлона анти-D). С их помощью можно как выявить группу крови, так и определить резус-принадлежность крови.

Отличие других растворов состоит в названии, поскольку входящие в их состав антитела – иммуноглобулины М и G – предоставляют возможность только произвести типизацию крови по антигенам АВ0. Различие заключается исключительно в механизме слипания эритроцитов (агглютинация прямая/непрямая).

У каждого из этих препаратов есть свои собственные особенности использования и срок годности. Однако наибольшей популярностью в лабораторной клинической диагностике пользуются только 3 вышеуказанных препарата (анти-А, анти-В, анти-D).

Как определить группу в случае неверной трактовки результатов анализа

Иногда возможно получение недостоверных, ложных результатов. К примеру, если при добавлении к препарату крови изменился их цвет или если агглютинация наблюдается во всех ячейках планшетки.

Чтобы предотвратить такие результаты, если выполняется определение группы цоликлонами, алгоритм действий предусматривает определенные правила. Сначала следует посмотреть на срок обращения цоликлонов. Недопустимо использовать реагенты, у которых истек срок годности.

Обязательно нужно соблюдать и все условия правильного проведения процедуры. Помещение должно иметь хорошо оборудованное рабочее место с температурным режимом и достаточным освещением. Если инструкция к препарату содержит указания и касательно требуемой влажности, следует учитывать и данный фактор.

Немалое значение имеет и чистота планшетки, так как ее загрязнение может привести к возникновению ошибок в исследовании и, как следствие, к получению неверных результатов.

Где можно провести анализ?

Определение группы цоликлонами постепенно приобретает все большую популярность. Если раньше эта процедура проводилась исключительно в специализированных стационарах (к примеру, только в отделениях гематологии и хирургии), то сейчас процедура доступна почти в любой достаточно оборудованной лаборатории.

Методика цоликлонов находит применение и в поликлиниках. Там ее включают различные методы экспресс-определения группы крови, проводимые с целью скорейшего выставления пациенту диагноза.

На платной основе проведение этой услуги предлагают и многие центры косметологии и частной медицины. Бесплатно данная процедура, как было сказано выше, проводится по направлению терапевта или лечащего врача.

Если отсутствует возможность обратиться за анализом крови в поликлинику, исследование можно провести и самостоятельно при наличии набора препаратов и специальной планшетки. Однако необходимо помнить, что для получения достоверных результатов требуется соблюдать условия процедуры, в особенности это касается стерильности.

Источник: https://donor08.ru/patologii/opredelenie-gruppy-krovi-tsoliklonami-rezus-faktora-tablitsa-rasshifrovka-rezultatov.html

Цоликлоны для определения группы крови

Определение крови по цоликлонам

Определение группы крови по цоликлонам — это простая процедура, которая проводится в лабораторных условиях. В ее основе лежит химическая реакция между моноклональными сыворотками и агглютиногенами.

В результате можно узнать не только группу крови, но и ее резус-фактор, и эти методики считаются наиболее простыми, точными и доступными. Вещества продаются в удобных флаконах разного объема и оснащены дозатором-капельницей.

Проведение анализа занимает несколько минут, благодаря чему в лабораториях можно в течение дня обработать огромное количество проб.

Что такое цоликлоны?

Цоликоны — это моноклональные антитела, которые находятся в солевом растворе.

Вещество получило свое название в честь его изобретателей — Центральный Ордена Ленина Институт, сегодня переименованный в Гематологический научный центр. Они представлены жидкостью, которая продается во флаконах объемом 5 и 10 мл.

Это универсальный реагент для гематологических исследований, поскольку позволяет определить группу крови как в системе АВ0, так в системе резус.

Выделяют 3 основные разновидности цоликлонов:

  • анти-А — жидкость красного цвета;
  • анти-В — синее вещество;
  • анти-D — прозрачный реагент для определения резус-фактора.

Для определения группы крови применяются цоликлоны анти-А и анти-В. Они вступают в биохимические реакции с агглютиногенами, которые расположены на поверхности эритроцитов — красных кровяных клеток.

Эритроциты группы крови А содержат агглютиноген А, который прореагирует с цоликлоном анти-А. Аналогично определяется содержание агглютингена В.

Положительным результатом реакции считается склеивание эритроцитов и выпадение их в осадок.

СПРАВКА! Агглютинация — это склеивание веществ. Агглютиногенами называются соединения, которые находятся на поверхности эритроцитов и вызывают их склеивание при соединении несовместимых групп крови.

Процедура определения группы крови

Процедура, как определить группу крови с помощью цоликлонов, очень проста и проводится за несколько минут. Для нее потребуется нативная («живая») капиллярная кровь, допускается наличие в ней консерванта. Также понадобится планшет — плоская поверхность из стекла, на которой будет происходить реакция. Процедуру проводят по определенному алгоритму:

  1. нанести две большие капли цоликлонов на поверхность планшета (обычно реагент анти-А находится слева, а анти-В — справа);
  2. добавить небольшие капли крови, которые по объему будут в 10 раз меньше реагентов;
  3. аккуратно двигать планшет, чтобы кровь смешалась с раствором, но две капли не соединились друг с другом;
  4. через несколько минут наблюдать результаты.

Для установления группы подойдет и кровь с добавлением консерванта. Однако простота методики позволяет проводить ее на месте непосредственно после взятия биологического материала. Достаточно набрать небольшое количество капиллярной крови из пальца, чтобы ее полностью хватило для проведения анализа.

Анализ проводится на специальном стеклянном планшете

Полезные советы

Определение группы и резус-фактора крови с использованием цоликлонов считается одним из самых простых и доступных методов, поэтому широко применяется в лабораториях разного уровня. Кроме того, такой анализ дает достоверные результаты.

Однако в некоторых случаях они бывают ложными, а причиной этому становится несоблюдение нескольких правил.

Простая инструкция по применению цоликлонов и работа с ними позволит избежать получения недостоверных результатов и необходимости проводить исследование заново:

  • хранить реагенты в холодильнике, при температуре от 2 до 8 градусов, а распечатанный флакон использовать в течение 30 суток;
  • исследования проводятся при комнатной температуре, а в слишком жарком помещении рекомендуется периодически охлаждать стеклянную поверхность планшета;
  • обозначать на планшете разные цоликлоны маркером, поскольку их цвет после добавления крови быстро исчезает;
  • соблюдать правильные пропорции реагентов: если крови будет слишком много, реакция агглютинации эритроцитов будет мало выражена;
  • не допускать смешивания капель жидкости, в которых уже присутствуют разные типы цолкиклонов — в таком случае реакцию придется проводить заново;
  • обозначать окончательный результат не менее, чем через 3 минуты после начала реакции.

Важно также соблюдать последовательность действий во время анализа. Так, если стеклянную поверхность не раскачивать, даже при отсутствии реакции склеивания эритроциты будут расположены в краевой зоне капли. Это может стать причиной неправильной интерпретации результатов.

При определении группы крови необходимо учитывать острые и хронические заболевания, которые наблюдаются у пациента. При патологиях печени и органов кроветворной системы, а также болезнях, которые протекают по типу сепсиса, может происходить явление патагглютинации. Эритроциты будут склеиваться даже при контакте с обычным физиологическим раствором.

Напротив, при лейкозе кровяные клетки не отреагируют на присутствие антител, и агглютинация не произойдет.

Цоликлоны — это важные реагенты, которые используются ежедневно в гематологических лабораториях. Они позволяют быстро и безошибочно определить группу крови и ее резус без дополнительного оборудования и специальных навыков. Однако важно выполнять простой алгоритм, чтобы результаты анализа действительно были достоверными.

Источник: https://icvtormet.ru/krov/coliklony-opredeleniya-gruppy

Определение группы крови: цоликлоны, стандартные сыворотки и перекрестный способ

Определение крови по цоликлонам

Определение группы крови и резус-фактора делятся на два способа:

Экспресс-диагностика (первичное определение группы крови и Rh-фактора) не учитывает антигены Келл, не говоря уже про другие системы верификации. Поэтому цоликлоны применяют только для первичного определения группы крови и резус-фактора и при экстренных показаниях трансфузии компонентов крови.

Подробнее о самой редкой группе крови в Мире можно найти здесь.

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А, анти-В и Анти-D супер является наиболее современным и относительно простым методом. Для определения группы крови используются цоликлоны, т.е. моноклональные антитела.

Что требуется для определения группы крови и резус-фактора?

цоликлон анти-А;

цоликлон анти-В;

цоликлон анти-D;

– раствор натрия хлорида 0,9 %; специальный планшет; стерильные палочки.

Алгоритм и порядок определения группы крови

Нанести цоликлоны анти-А, анти-В на специальный планшет по одной большой капле (0,1 мл), под соответствующими надписями.

Рядом с ними капнуть исследуемую кровь (0,01–0,03 мл) по одной маленькой капле. Перемешать их и наблюдать за наступлением или отсутствием реакции агглютинации в течение 3 мин. При сомнительном результате добавить 1 каплю 0,9% физиологического раствора.

 Расшифровка результатов определения группы крови

  • если реакция агглютинации наступила с анти-А цоликлоном, то исследуемая кровь относится к группе А (II);
  • если реакция агглютинации наступила с анти-B цоликлоном, то исследуемая кровь относится к группе B (III);
  • если реакция агглютинации не наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе 0 (I);
  • если реакция агглютинации наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе AB (IV), как показано на рисунке.

AB (IV)

Определение резус-фактора цоликлоном Анти-D

На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D цоликлона и маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови пациента. За наступлением реакции агглютинации или её отсутствием наблюдают в течение 3 мин.

  • если реакция агглютинации наступила с цоликлоном анти-D , то исследуемая кровь относится к резус-положительной (Rh+)
  • если реакция агглютинации не наступила с цоликлоном анти-D, то исследуемая кровь относится к резус-отрицательной (Rh—)

AB (IV)Rh-

Другими словами, при смешивании цоликлона Анти-D с резус-положительными эритроцитами наступает реакция агглютинации, а если кровь резус-отрицательная — агглютинация отсутствует (как показано на рисунке — четвертая группа крови резус-отрицательная).

Определение групп крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками — поиск и обнаружение в крови антигенов А и В с помощью реакции агглютинации. Для достижения цели используют:

  • Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп крови О (I) — бесцветная, А (II) — синяя, В (III) — красная, АВ (IV) — жёлтая.
  • Белые тарелки, маркированные группами крови: 0 (I), А (II), В (III), AB (IV).
  • NaCl 0,9%
  • Стеклянные палочки
  1. Подписать тарелку (Ф.И.О. пациента);
  2. Нанести обозначения двух серий стандартных сывороток I, II и III групп крови в объёме 0,1 мл, образующие два ряда по три капли слева направо: 0 (I), А (II), В (III);
  3. Забрать кровь из вены. Шесть капель исследуемой крови пациента перенести стеклянной палочкой на пластину в шесть точек рядом с каплей стандартной сыворотки и перемешать.

Агглютинация начнется через 30 сек. В те капли, где произошла агглютинация, добавить по одной капле NaCl 0,9% и оценить результат.

Оценка результатов определение группы крови стандартными сыворотками

Положительная реакция агглютинации может быть пескообразной или лепестковой. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет. Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы (двух серий) должны совпадать.

Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками после наблюдения в течение 5 мин.

При этом следует отметить, что если сыворотки всех трёх групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена (А и В) и принадлежит к группе AB (IV).

Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB (IV), не содержащей агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0 (I), А (II) и В (III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ (IV).

Определение группы крови перекрестным способом — обнаружение наличия или отсутствия в исследуемой крови антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, а также антител α и β с помощью стандартных эритроцитов. Реакцию со стандартными сыворотками проводят описанным выше способом.

Для реакции со стандартными эритроцитами необходимы стандартные эритроциты трёх групп крови: 0 (I), А (II), B (III).

Методика проведения реакции со стандартными эритроцитами

  1. Кровь для исследования берут из вены в пробирку, центрифугируют или оставляют на 30 мин для получения сыворотки.
  2. На маркированную тарелку наносят три больших капли (0,1 мл) сыворотки крови из пробирки, а рядом с ними по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп.
  3. Соответствующие капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией добавляют NaCl 0,9% и оценивают результат.

Оценка результатов проведения реакции со стандартными эритроцитами

Оценивают результаты, полученные со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и стандартными эритроцитами. Особенность результатов реакции со стандартными эритроцитами — эритроциты группы 0 (I) считают контрольными.

Результат перекрёстного способа считают достоверным, если при  реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами ответы о группе исследуемой крови совпадают.

Если этого не происходит, обе реакции следует переделать.

Источник: https://anest-rean.ru/gruppa-krovi/opredelenie/

Мед-Консультация
Добавить комментарий